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承接第一部结尾，吸血鬼猎人安娜成功消灭了“亚种”吸血鬼军团，但一块名为“该隐之血”的神秘血石被一名黑市古董商带走。三年后，一支由吸血鬼生物学家、雇佣兵和考古学家组成的探险队受委托进入罗马尼亚某座从未被记载过的地下教堂，寻找这块血石。他们顺利找到血石，却发现其能量能使普通吸血鬼进化为“夜行者”——速度、力量、再生能力全面超越亚种。在撤退途中，队员们不慎打破了教堂深处的一堵封印墙，释放出被教会囚禁上千年的纯血母体吸血鬼“莉莉丝”。莉莉丝操控血石，将队员们逐个转化或杀死。女主角、生物学家艾琳娜发现血石的核心是自己的上古祖先遗骨，她必须在被完全转化前，利用血石与莉莉丝同归于尽。结局艾琳娜被冻死在冰窟中，但血石碎片落入了一只蝙蝠口中。
相比前作，本片在神话体系构建上更加完整，“血石”的设定极富悲剧美感。纯血母体的造型设计堪称经典，兼具神圣与邪性。地下空间的幽闭恐惧与吸血鬼的速度感结合，节奏紧绷无尿点。最后蝙蝠叼走碎片的开放式结尾，让人无比期待第三部。
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